大鼠成纤维样滑膜细胞培养指南 - 尊龙凯时品牌助力生物医疗

尊龙凯时提供的大鼠成纤维样滑膜细胞FLS培养说明书，旨在为研究人员提供全面的细胞培养指导。

一、细胞培养条件

细胞名称： 大鼠成纤维样滑膜细胞FLS
生长特性： 贴壁生长
冻存条件： 无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系： DMEM+10%FBS+1%双抗
传代方法： 建议首次以1:2比例传代，2天后更换培养基。
备注： 需用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应立即培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳处理方式。收到细胞后，使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净台进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，再进行后续处理。通过显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存不同倍数的图像（建议包括40x、100x、200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据。如果未提供照片，默认为收到的细胞状态良好。（传代后，建议一瓶用原瓶的完全培养基，另一瓶用自行配制的完全培养基，以进行对比培养，换液后应松开瓶盖。）

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞未超过80%汇合度时，将完全培养液收集至离心管，保留5ml完全培养基并放入37℃、5%CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

弃去培养上清，用不含钙和镁的PBS润洗细胞1-2次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，迅速返回操作台，轻轻敲打培养瓶后加入5ml完全培养基终止消化。
轻轻吹打细胞使之完全脱落并吸出，悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
按1:2比例将细胞悬液分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，再放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长至覆盖培养瓶80%的面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞。
加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，轻轻观察细胞状态，待细胞变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，通过加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001）混匀后转入冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱存放，如需转入液氮罐，需在-80℃中存放24小时以上再转移。

c. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），将其迅速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，然后用75%的酒精擦拭外壁。
将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，重新用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
第二天更换为新鲜的完全培养基进行继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，某些细胞粘附不牢，可能会发生脱落现象，属正常现象。如细胞脱离较多，可按以下方法处理：将培养瓶内所有液体收集至离心管，1000RPM离心5分钟，获得上清作过渡培养，再加入胰酶1-2ml，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应。再次离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，再放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。

五、售后条款

1）可重发的情况及判定标准

细胞在运输途中遇到问题（如丢失、破损、严重漏液）可申请重发。
细胞污染问题需在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发。
常温发货细胞静置24小时内，干冰恰存发货细胞复苏后24小时内，如绝大多数细胞未存活需提供真实照片，审核后可重发。
细胞复苏后24小时内或常温发货静置4小时且未开封情况下出现污染可申请重发。
细胞活性问题需在产品收到7天内提供真实实验结果，通过台盼蓝染色法验证细胞活力，核实后予以重发。
在收到当天及第2、3天内需拍照，未通知的视为产品合格。4-7天内出现问题需提供收到细胞前三天照片及发生问题时的照片，并与技术人员沟通，经确认判断责任后可重发。

2）不予重发的情况

因客户造成的细胞污染不予重发。
客户因不当操作导致细胞状态不佳不予重发。
使用非本库推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不佳不予重发。
细胞状态不佳且未提供细胞培养前三天照片不予重发。
细胞培养时经其他处理的不予重发。
在收到2天内未告知的情况不予重发。
其他情况将根据具体情况而定。

我们的目标是为各类研究提供高品质的细胞资源，感谢您选择尊龙凯时，如需帮助请随时联系我们的技术支持。