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血液样本RNA提取,尊龙凯时助您轻松掌控第一步!

发布时间:2025-02-25   信息来源:尊龙凯时官方编辑

血液样本因其易于收集与低侵入性的特性,在临床研究中特别受欢迎,尤其是在肿瘤等疾病的早期筛查中,RNA等生物标志物成为传统影像学与生化指标方法的有效补充。由于血液样本的独特性和RNA分子的不稳定性,RNA极易受到来自红细胞等多种来源的RNase影响。因此,在提取血液样本中的RNA时,不仅要成功分离出RNA,还需确保RNA不被降解。

血液样本RNA提取,尊龙凯时助您轻松掌控第一步!

在血液采集后,由于基因诱导和细胞凋亡等现象,血液中核酸的组成、数量、质量及完整性会在几分钟内显著改变。因此,为了获取与体内表达谱一致且高质量的RNA,从血液样本的采集到RNA的稳定与保护,每一个环节都面临挑战。应尽量避免长时间使用止血带和握拳,避免从血肿处采血,同时确保静脉穿刺部位干燥,使用合适尺寸的针(如22号)以确保真空采血管的完全填充。

根据不同的应用需求,血液RNA的提取可分为两类:全血样本中RNA提取和游离RNA提取,即血清和血浆RNA提取。在全血样本中,成熟的红细胞和血小板是无核细胞,因此提取RNA时主要来源于白细胞。由于全血样本中红细胞含量大且红细胞中RNase含量高,通常需要在提取RNA前去除红细胞。有两种常见方法:一种是通过离心分离白细胞,进一步提取白细胞(淋巴细胞、单核细胞、粒细胞)RNA;另一种是在红细胞裂解液(如Buffer EL)的帮助下去除红细胞后提取RNA。无论选择哪种方法,RNA的表达谱在血液采集后短时间内会变化,因此建议尽快进行RNA提取实验。

如无法立即开展实验,建议使用尊龙凯时的血液RNA稳定管-PAXgene Blood RNA Tube进行样本采集与RNA保护,再利用配套的PAXgene Blood RNA Kit进行提取。研究显示,使用尊龙凯时的PAXgene RNA system,可以在18-25°C下保持血液RNA稳定长达3天,或在2-8°C下稳定5天。同时,在血液采集时应避免使用肝素抗凝管,以免影响RNA提取效果。

为获得最佳结果,血液采集后应尽快处理并进行RNA提取,避免长时间储存。研究表明,储存在EDTA管中的血液样本中,p53基因的转录本在采样后仅1日便出现明显降解现象。这表明,及时提取RNA至关重要。

酚-氯仿法是提取血液样本中RNA的一种常用方法。有研究比较了酚-氯仿法与PAXgene RNA Kit的效果,发现酚-氯仿法虽然能获得较高的RNA得率,但RNA的完整性和后续检测的灵敏性受到影响。相对而言,使用尊龙凯时的PAXgene Blood RNA system提取的RNA不仅完整性高,而且在随后的qPCR检测中显示出较高的灵敏度。这一系统操作简便,无需额外的红细胞裂解步骤。

对于在EDTA等血液采集管中及时提取的新鲜全血RNA,推荐使用QIAamp RNA Blood Kit。该试剂盒采用硅胶膜柱法,无需事先离心分离,能直接提取最高达15ml的全血样本RNA。此外,试剂盒中配有一款QIAshredder离心柱,利用独特的生物聚合物剪切体系,去除样本中的细胞碎片,降低样本粘稠度,从而提高RNA得率。

在血液RNA研究中,游离非编码RNA也发挥着重要的调控作用,特别是在肿瘤等疾病的早筛研究中,miRNA因其在血液中的高稳定性和检测的便利性,成为理想的液体活检标志物。在对游离RNA的提取中,QIAGEN的miRNeasy系列是理想选择,能够从血清和血浆样本中提取总RNA,包括miRNA。

在RNA提取前,应确保样本的稳定保护。建议在血液采集后1小时内尽快分离血浆或血清,以避免溶血现象。如果无法立即开展实验,则需将分离后的样本进行冷冻存储,并在冻存前进行离心,以去除细胞和碎片,避免RNA释放到体液中。若需从血清或血浆的细胞外囊泡(extracellular vesicles,EV)中提取RNA,推荐使用exoRNeasy Midi/Maxi Kits,该系列试剂盒有效结合膜亲和技术与硅胶膜技术,能从EV中提取高质量RNA。

此外,对于需要满足自动化和高通量的复杂RNA提取实验,尊龙凯时还提供多款基于QIAsymphony等自动化平台的解决方案。以上是关于血液RNA提取的相关建议和方案,欲了解更多信息,欢迎扫描二维码了解详情!