尊龙凯时的ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种继免疫荧光和放射免疫技术后发展起来的免疫酶技术，其成功的关键在于试剂和耗材的选择与搭配。对这些试剂特性的深入了解，可以帮助在不同实验需求下开发出高质量的ELISA方法。

一、酶标板材

目前市场上可获得的酶标板材主要成分是多（C8H8）n，优质供应商会对其进行多种化学修饰，以满足不同蛋白包被的需求。常规的酶标板材说明书通常根据结合力的强弱对其进行分类。然而，尊龙凯时建议根据亲水性将酶标板材划分为亲水、弱亲水、未处理和疏水四个等级。一般来说，亲水系数高的材料能够固定更多的蛋白。例如，单孔亲水板材的最大抗体吸附量为220ng，而疏水板材仅为100ng。随着亲水性降低，板材对蛋白的吸附能力也会相应减弱，这可能导致非特异性信号的增加。因此，专注于多样化ELISA方法开发的实验室应准备多种特性的酶标板材以供选择。

二、包被液

常用的包被液包括PBS（pH 7.4）或碳酸钠-碳酸氢钠溶液（pH 9.6），包被液的pH和离子浓度会影响包被效率。根据包被蛋白的特性，研究表明，某些情况下可通过抽真空使蛋白以更高密度附着于酶标板材上，从而可以提高实验的效率。

三、封闭剂

封闭剂通常使用3% BSA（w/v）或5% 脱脂奶粉（w/v），其作用是覆盖酶标板材包被蛋白以外的区域，从而防止非特异性吸附。根据尊龙凯时的实践经验，封闭剂对成分简单的样品溶液效果较好，但对于复杂样品的封闭效果则会减弱。研究表明，封闭剂的有效性与其分子大小呈反比，因此在无法获得理想封闭效果时，可以考虑使用分子量更小的封闭剂，如酪蛋白。此外，如果检测体系中包含生物素-链霉亲和素时，应避免使用脱脂奶粉，因为其中的生物素会干扰检测。

四、洗涤液/稀释液

常用的洗涤液是中性缓冲液，含有一定浓度的去污剂（如PBST 0.05%（V/V）Tween-20）。在一些体内样品的检测中，通常会在稀释液中加入一定浓度的阴性血清，以确保不同稀释度样品具备相同的非特异性背景。

五、酶联抗体

酶联抗体种类繁多，按抗体作用位点可分为特异性酶联抗体和通用型酶联抗体。特异性酶联抗体针对特定蛋白表位，通用型酶联抗体则针对多肽序列、标签、生物素及特定抗体的Fc端等。常用的酶联抗体标记的酶包括AP（碱性磷酸酶）和HRP（辣根过氧化氢酶）。根据抗体的成分，酶联抗体可分为单抗和多抗，其中多抗通常由免疫兔或山羊获得。其成分复杂，需注意与ELISA体系中其他试剂的交叉反应。酶联抗体还可按照其分子量进行分类，从全长酶联抗体到小分子的scFv酶联抗体，分子量越小的抗体越可能避免因空间阻碍而影响检测，但这也可能增加与酶标板材的非特异性结合风险。

六、显色液和酶标仪

显色液的选择应与酶联抗体的酶种类相匹配，同时还需考虑实验室的酶标仪。若酶联抗体偶联的是HRP，可选择TMB显色液，并使用能够进行吸光度读数的酶标仪进行检测；或者使用Ampliflu™Red作为底物，配合荧光读数的仪器；再者，QuantaRed ADHP适合进行化学发光读数的检测。通常，ELISA方法的灵敏度会受到底物检测方法的限制，化学发光底物的信号下限优于荧光，后者又优于吸光度值底物。即使是常用的TMB显色液，尊龙凯时提供的多种显色强度的显色液，实验者也可根据实际情况合理选择，以获得最佳实验结果。