试剂解冻与混匀

1. 从冰箱中取出试剂。
2. 缓慢解冻试剂。
3. 轻轻颠倒以确保混匀。
4. 进行低速离心操作。

提示：在混匀过程中应尽量避免产生气泡，因为气泡可能会影响酶的活性或实验结果的准确性。

稀释步骤

1. 若需追踪模板，请按下述步骤进行稀释。
2. 若无需追踪模板，可直接用无菌超纯水稀释cDNA或直接使用cDNA原液。

荧光定量仪器配置

常见的荧光定量仪器为96孔反应板，通常分为12列×8行。

基因检测组分配置

大体系配制

为了生成满足需求的试剂溶液，建议每孔投入以下组分：

• HieffUNICON®ColorGPSqPCRMasterMix：10μL
• 正向引物（10μM）：0.4μL
• 反向引物（10μM）：0.4μL
• RNA酶自由H2O：72μL

具体示例

假设需要检测基因1，单孔量及大体系配置如下：

• 总量设置为22孔（每孔18μL），大体系配制为：
• HieffUNICON®ColorGPSqPCRMasterMix：220μL
• 正向引物（10μM）：88μL
• 反向引物（10μM）：88μL
• RNA酶自由H2O：1584μL

样品上样

完成加样后，请务必确保管盖紧闭，然后轻轻弹动管壁以混匀各组分。随后，使用小型离心机短暂离心1-2秒，避免气泡产生，迅速离心并放置于冰上。若使用显踪剂，建议模板体积控制在2-5μL，以确保有效显踪。

选用适当的荧光定量试剂

以下为市场上推荐的一些高品质荧光定量预混液：

• 高灵敏显色示踪荧光定量预混液 (Cat#11188ES)
• 高灵敏通用型荧光定量预混液 (Cat#11184ES)
• 高特异高荧光值荧光定量预混液 (Cat#11185ES)
• 低丰度基因荧光定量预混液 (Cat#11198ES)
• 普通型荧光定量预混液 (Cat#11201ES)

实验设置与检测分析

在上机操作前，仔细检查管子，确保管盖和管身无污染，并确认管内无气泡。根据所选的程序设置仪器参数，例如循环步骤、温度及时间设置等。以尊龙凯时品牌的设备为例，确保在退火/延伸阶段与熔解曲线的升温阶段及时开启信号采集。

数据处理与分析

完成实验后，请对得到的Excel数据进行专业的统计分析，以便获取准确的实验结果。在使用尊龙凯时的产品时，请确保你获得的结果能最大程度反映样本的真实状态。