尊龙凯时提供的人套细胞淋巴瘤细胞REC1的培养说明书如下:
一、细胞培养条件
细胞名称:人套细胞淋巴瘤细胞REC1
生长特性:悬浮生长
冻存条件:无血清冻存液
培养体系:1640+10% FBS + 1% P/S
传代方法:首次建议以1:2的比例传代
传代情况:每2天更换培养液
备注:建议使用无菌离心管收集培养基,作为过渡对比,若效果不理想,请直接购买我们的完全培养基。
二、细胞收到后的处理
在培养至良好状态后,建议灌满完全培养液并密封瓶口,这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后,使用75%酒精喷洒整个细胞瓶,消毒后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时,以稳定细胞状态后再进行处理。建议用显微镜观察细胞生长情况,并拍照保存不同倍数的照片(最好是40x, 100x, 200x各一张)。前三天的照片是重要的售后依据,未提供照片将默认收到状态良好。
三、细胞培养步骤
a. 细胞传代
若细胞汇合度未超过80%,请将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中,保留5ml,放入37℃、5% CO2孵箱培养;如细胞密度超过80%,可进行以下传代步骤:
- 去除培养上清,用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
- 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中,放置于37℃培养箱中消化1-2分钟,并在显微镜下观察细胞消化情况。若细胞变圆并脱落,迅速轻敲瓶子并加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
- 轻轻吹打细胞使其完全脱落后,将悬液转移至15ml离心管中,以1000RPM离心5分钟,弃去上清液,然后补加1-2ml完全培养基重悬。
- 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代(两个T25瓶),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,然后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱继续培养。
b. 细胞冻存
- 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时,弃去培养液,用PBS清洗一次。
- 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,观察细胞变圆后,加入5ml完全培养液终止消化,轻轻吹打使细胞脱落,然后转移悬液至15ml离心管中,1000rpm离心5分钟。
- 去除上清液后,加入1ml的雅吉生物无血清冻存液(货号:C7001),混匀后转移至冻存管中。
- 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱,若需转入液氮罐中,需先在-80℃冰箱中存放24小时后再进行转移。
c. 细胞复苏
- 从液氮中取出细胞冻存管(注意防护),迅速置入37℃水浴中解冻,直到管内无冰晶,再用75%酒精擦拭管外壁。
- 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5分钟。
- 弃去上清后,使用5ml完全培养基重悬,接种至T25培养瓶,放置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
- 次日更换新鲜完全培养基,继续培养。
四、注意事项
某些细胞可能在运输过程中发生脱落,这是正常现象。如脱落较多,可将所有培养液收集至离心管中,1000rpm离心5分钟以收集细胞,随后加入胰酶处理1-2分钟,终止反应后重新进行分瓶传代。
五、售后条款
1)可重发的情况
- 细胞在运输途中出现问题,导致细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液。
- 细胞污染问题,需在收到产品48小时内提供真实实验结果。
- 常温发货细胞静置24小时后或干冰发货细胞复苏后24小时内,绝大多数未存活。需提供真实的细胞状态照片。
- 收到细胞后2-3天内拍照,若未告知视为产品合格。
2)不予重发的情况
- 因客户原因造成的细胞污染或操作不当导致细胞状态不佳。
- 未遵循推荐的细胞培养体系,导致细胞状态不佳。
- 在收到细胞后的2天内未作出通知。
选择尊龙凯时的人套细胞淋巴瘤细胞REC1,确保获取高质量的细胞培养体验。如有任何问题,请及时与我们联系。