在生物医学实验中,电泳缓冲液是必不可少的试剂,其中包括50× Tris-乙酸(TAE)和5× Tris-硼/酸(TBE)缓冲液的制备。本文将展示这些缓冲液的配制方法。
50× Tris-乙酸(TAE)缓冲液配制
要配制1L的50× TAE缓冲液,所需成分及用量如下:
- 2 mol/L Tris碱 - 242g
- 1 mol/L 乙酸 - 571ml的冰乙酸(174 mol/L)
- 100 mmol/L EDTA(pH 8.0) - 200ml的0.5 mol/L EDTA
- 去离子水 - 补足至1L
5× Tris-硼/酸(TBE)缓冲液配制
为制备1L的5× TBE缓冲液,需按以下比例添加成分:
- 445 mmol/L Tris碱 - 54g
- 445 mmol/L 硼酸盐 - 275g
- 10 mmol/L EDTA(pH 8.0) - 20ml的0.5 mol/L EDTA
- 去离子水 - 补足至1L
染料配制
配制染料是优化电泳过程中的重要一步:
- 溴酚蓝(bromophenol blue):将1g水溶性钠型溴酚蓝溶解于100ml水中,搅拌至完全溶解。
- 二甲/苯青FF(xylenecyanole FF):溶解1g于足量水中,定容至100ml。
- 溴化乙锭(ethidium bromide):小心称取1g,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌至完全溶解,注意用铝箔包裹储存于4℃。
凝胶上样液配制
以下是几种凝胶上样液的制备方法:
6×碱性凝胶上样液
- 03N氢氧化钠 - 6mmol/L
- 18%聚蔗糖(400型) - 0.15%
- 0.5%溴甲/酚绿 - 0.25%
- 0.5%二甲/苯青FF - 0.15%
- 去离子水 - 300ul
- 10N氢氧化钠 - 120ul
- 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0) - 18g
- 补足至10ml
6×聚蔗糖凝胶上样液
- 0.15%溴酚蓝
- 0.15%二甲/苯青FF
- 5mmol/L EDTA
- 15%聚蔗糖(400型)
- 去离子水 - 15ml
- 1%溴酚蓝 - 15ml
- 1%二甲/苯青FF - 100ul
- 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0) - 15g
- 补足至10ml
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在实验室中合理地配制和使用电泳缓冲液,可以大幅提高实验结果的可靠性和重复性。希望本篇文章能对您的研究有所帮助!